Comme nous le savons, une spécification du gel de silice C18 est la charge en carbone. Pourquoi la charge en carbone affecte-t-elle la colonne HPLC ? Pour un même type de colonne, plus le taux de carbone est élevé, plus la quantité de carbone lié est importante, ce qui signifie également une capacité de rétention et une capacité de charge supérieures.

La colonne C8 est utilisée en chromatographie en phase inverse. Typiquement, cette technique utilise une phase stationnaire hydrophobe. Cependant, les phases stationnaires ou colonnes à support solide contiennent de la silice modifiée. Ici, la silice est une phase stationnaire hydrophile. De plus, elle contient des groupes alkyle liés de manière covalente à la silice pour former une phase stationnaire hydrophobe. Par ailleurs, la phase mobile en chromatographie inverse est une phase aqueuse. Ainsi, l'immobilisation présente une forte affinité pour les composés non polaires de l'échantillon.

En particulier, la colonne C8 contient une chaîne carbonée octyle à huit atomes de carbone comme groupes alkyle, utilisés pour modifier la colonne de silice. Ces chaînes carbonées sont relativement courtes. Cette caractéristique réduit l'hydrophobicité et la densité de la phase stationnaire. Par conséquent, les composés non polaires ont des temps de rétention plus courts et une séparation moindre dans la colonne C8.

Les colonnes C18 sont le type de colonne le moins cher et le plus courant en chromatographie inverse. Le groupe alkyle utilisé pour la modification est une chaîne carbonée octadécyle dans la colonne C18. Celle-ci possède une chaîne carbonée plus longue. De plus, la densité de la colonne C18 est plus élevée en raison du nombre accru d'atomes de carbone dans le groupe alkyle. Ainsi, l'hydrophobicité de la colonne C18 est également importante. Cela permet des temps de rétention plus longs pour les composés non polaires, aboutissant à de meilleures séparations. Cela réduit également l'étalement des courbes de séparation.

Par ailleurs, les colonnes C18 sont plus adaptées à la séparation de composés plus hydrophobes, comme les acides gras à longue chaîne. À l'inverse, les colonnes C8 conviennent mieux à la séparation de petits composés organiques.

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