Hashtag : Ce que vous devez savoir sur le endcapping
Qu'est-ce que l'endcapping ?
Lorsque la phase stationnaire à base de silice est liée à des groupes fonctionnels, il est impossible d'atteindre tous les groupes silanols en raison de l'encombrement stérique et d'autres facteurs. Les groupes silanols restants sont appelés groupes silanols résiduels. Ils provoquent généralement un allongement des pics des composés basiques et doivent être silylés. Ce processus de silylation, appelé « endcapping », vise à réduire l'activité du silanol.
Qu'est-ce que le double endcapping ?
Le double endcapping signifie qu'un produit est coiffé deux fois. L'application d'un double (ou triple) endcapping permet de minimiser davantage les interactions silanol et d'améliorer la stabilité à pH moyen. Il est difficile d'éliminer tous les groupes silanol résiduels, même avec un endcapping. Ce procédé n'est pas sûr à 100 %, et il reste toujours un petit nombre de silanols à la surface. Cependant, ils sont souvent non réactifs en raison de l'encombrement stérique dû à l'agent de coiffage et aux groupes fonctionnels. De nombreux fabricants choisissent d'appliquer plusieurs endcappings afin de minimiser au maximum l'activité des silanols.
Pourquoi les colonnes HPLC en phase inverse ont-elles un endcapping ?
Le capsulage est le plus souvent utilisé avec les colonnes HPLC en phase inverse. Il minimise l'interaction silanol en réduisant le groupe silanol résiduel. Il protège le support de silice de la dissolution et réduit également l'adsorption indésirable de composés basiques ou ioniques. Il existe différentes procédures de capsulage dans les colonnes HPLC modernes. Le graphique ci-dessous illustre la différence entre la liaison en phase stationnaire traditionnelle et la réaction de capsulage TMS :
Quelle est la différence entre les colonnes HPLC en phase inverse normale et les colonnes HPLC à terminaison terminale ?
Lors de la fabrication de colonnes en phase inverse, il est courant d'utiliser de la silice pour réagir avec un silane contenant une chaîne latérale alcane. Si l'alcane est trop gros, il peut être empêché de réagir avec certains groupes silanols présents à la surface de la silice. Ces matériaux sont dits « non coiffés en bout ». Le silanol non réagi peut ensuite réagir par coiffage en bout avec un silane contenant un petit groupe alkyle. Ces produits sont dits « coiffés en bout ».
Certaines applications ont été développées avec des matériaux non coiffés, et ceux-ci doivent être utilisés pour reproduire ces résultats. Concernant les matériaux coiffés, les spécialistes marketing peuvent vous dire qu'il existe des coiffages complets ou doubles, mais qu'il reste des groupes SiOH à la surface. Pour une séparation de base, ces groupes SiOH libres sont nécessaires pour certains composés. De plus, bien que les matériaux coiffés soient préférables pour la plupart des applications, il existe des cas où les matériaux non coiffés sont plus adaptés. Par exemple, pour séparer l'acide tartrique de l'acide quinique dans un jus de fruit, il est possible de le séparer de manière isocratique jusqu'à la base à l'aide d'une colonne C-18 non coiffée, mais peu de colonnes coiffées le permettent.
Quels sont les avantages de l’Endcapping ?
• L’interaction indésirable des analytes polaires ou chargés (acides, bases, etc.) est réduite car la quantité de groupes silanol disponibles est minimisée.
• Les matériaux à embouts ont une charge de carbone plus élevée à la surface.
• La traînée de pic peut être minimisée, ce qui permet d'obtenir une meilleure forme de pic.
• Les interactions minimisées du silanol sur la colonne à double extrémité réduisent la rétention.
• Lorsqu'il est utilisé dans des conditions difficiles (par exemple, pH extrême), le recouvrement d'extrémité aide à empêcher la surface de la silice fonctionnalisée d'être attaquée et hydrolysée.
Quand choisir des colonnes à extrémités coiffées ou non coiffées ?
Pour prolonger la durée de vie de la colonne, assurez-vous que le pH de la méthode se situe dans la plage de pH recommandée par la phase liée.
En général, les colonnes HPLC à end-capping constituent un bon choix pour les méthodes à pH moyen. À mesure que le pH augmente, la dissolution de la silice est réduite par end-capping.
Les colonnes HPLC non coiffées sont un bon choix pour les méthodes à faible pH.